| 何海旺， 谭冠宁，何虎翼， 何新民， 王 晖， 李丽淑， 唐洲萍.早熟马铃薯 ISSR-PCR反应体系优化及引物筛选[J].广东农业科学,2015,42(1):133-137 |
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早熟马铃薯 ISSR-PCR反应体系优化及引物筛选 |
| Optimization of ISSR-PCR reaction system and ISSR primer screening in early potato |
| 投稿时间：2014-04-25 |
| DOI： |
| 中文关键词: 马铃薯 ISSR 反应体系优化 引物筛选 |
| 英文关键词: potato ISSR reaction system optimization primer screening |
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| 中文摘要: |
| 为得出马铃薯 ISSR-PCR 最佳的反应体系，采用正交试验设计，对 rTaq DNA 聚合酶、Mg2+
、模板 DNA、dNTPs 和引物进行 5 因素 4 水平筛选。 结果表明，马铃薯 ISSR-PCR 的最佳反
应体系为院总体积 25 滋L 的反应体系中含有 rTaq DNA 聚合酶 0.5U、Mg2+浓度为 2.5mmol/L
、模板 DNA 用量为 75 ng、dNTPs 浓度为 200 滋mol/L、引物浓度为0.8 滋mol/L。这些因素对
PCR 反应的影响大小顺序为 Mg2+浓度>rTaq DNA 聚合酶用量> dNTPs 浓度=引物浓度>模板
DNA 用量。应用该最佳反应体系对 39 条 ISSR 引物进行筛选，得出 15 条条带清晰、条带数
多、重复性好的引物。并通过退火温度梯度试验得出筛选引物的最佳退火温度。 |
| 英文摘要: |
| To screen the optimum ISSR-PCR reaction system for potato, the experiment was conducted by using
orthogonal design with 4 levels of 5 factors (i.e. rTaq DNA polymerase, Mg2+, DNA, dNTPs and primers). Results showed
that the optimal reaction system of ISSR-PCR was as follows: 0.5 U rTaq DNA polymerase, 2.5 mmol/L Mg2+, 75 ng DNA,
200 mol/L dNTPs and 0.8 mol/L primer in 25 L reaction volume. And the PCR reaction effects was in the order of
Mg2+ > rTaq DNA polymerase> dNTPs = primer> DNA. Then, 39 ISSR primers were screened by using the optimal reaction
system, and 15 primers with clear band, more band number and good repeatability were selected. Finally, the optimized
annealing temperatures of the 15 primers were obtained by gradient PCR. |
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