| 刘 华1，施婷婷1，施志仪2.牙鲆精氨酸酶基因片段的克隆及序列分析[J].广东农业科学,2016,43(12):108-114 |
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牙鲆精氨酸酶基因片段的克隆及序列分析 |
| Cloning and sequencing of gene fragments ofParalichthys olivaceus arginase |
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| DOI：10.16768/j.issn.1004-874X.2016.12.019 |
| 中文关键词: 牙鲆 精氨酸酶 克隆 序列分析 |
| 英文关键词: Paralichthys olivaceus arginase molecular cloning sequence analysis |
| 基金项目:国家自然科学基金（30271017）；国家高等教育博士项目科研基金（20040264001） |
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| 中文摘要: |
| 根据GenBank 中虹鳟、大菱鲆、斑马鱼及其他生物的精氨酸酶基因序列设计并合成一对引物，
并提取变态期牙鲆仔鱼总RNA 作为模板进行RT-PCR，得到一条cDNA 片段。将产物连接到T 载体中，转
化、扩增重组质粒。提取大肠杆菌中的重组质粒进行DNA 测序。将DNA 测序所得到的基因序列翻译成蛋
白序列和已知的大菱鲆、鲤鱼、虹鳟、斑马鱼的精氨酸酶基因序列进行同源性分析。结果显示，利用RTPCR
的方法扩增出一条284 bp 的目的基因片段，比对结果发现，其与大菱鲆、鲤鱼、斑马鱼以及虹鳟精
氨酸酶基因蛋白序列的同源性分别为96％、85％、84％和82％。对蛋白序列进行生物信息学分析发现，
整个蛋白序列中无信号肽，无糖基化位点，无跨膜结构域，但含有一个典型的arginase 结构。在N- 端第
38～44、57～64、71～76、89～94 区段有β- 折叠中心；第7～18、50～52、81～87 区段可能形成α 螺旋区
域。Arg 蛋白N 端第37～45 和第74～77 区段为优势抗原表位区域。 |
| 英文摘要: |
| A pair of primers was designed and synthesized according to the conservative nucleotide sequence
（GenBank）of Scophthalmus maximus，Cyprinus carpio，Oncorhynchus mykiss，Danio rerio，et al. Total
RNA from Paralichthys olivaceus was extracted by using TRIzol Reagent．With the designed primers，a gene
fragment was obtained using RT-PCR method．The PCR products were purified and then cloned into pUcm-T
vector followed by sequencing．The results showed that a 284 bp gene fragment was obtained. Contrasted with
other species，the gene sequence obtained in this experiment showed 96％，85％，84％ and 82％ homology
with S. maximus，C. carpio，D. rerio，O. mykiss，respectively. Through sequencing the gene fragment of Arg by
bioinformatics technique，we found that Arg had no SignalP，no O-glycosylation sites，and no transmembrane
（TM）region，but had a character structure of arginase. There was a center of β-sheet in the N-terminal
N0.38-44，57-64，71-76，89-94. And the N-terminal No.7-18，50-52，81-87，may be the Alpha regions of
Arg protein. The N-terminal No.37-45，74-77，were the predominant epitopes. |
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