| 黄允真，张俊勤，李林林，董嘉文，向 勇，廖 明，孙敏华.2 群坦布苏病毒 NS1 蛋白抑制鸭Ⅰ型干扰素产生的机制研究[J].广东农业科学,2024,51(7):151-160 |
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2 群坦布苏病毒 NS1 蛋白抑制鸭Ⅰ型干扰素产生的机制研究 |
| Research on NS1 Proteins of Group 2 Tembusu Virus Inhibiting the Production of Duck Type I IFN |
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| DOI：10.16768/j.issn.1004-874X.2024.07.014 |
| 中文关键词: 坦布苏病毒 非结构蛋白 RIG-I 信号通路 I 型干扰素 TBK1 磷酸化 |
| 英文关键词: Tembusu virus non-structural protein RIG-I signaling pathway type I interferon TBK1 phosphorylation |
| 基金项目:国家自然科学基金（32102691，31902272）；广东省科技计划项目（2021B1212030015）；广东省“十四五”
农业科技创新十大主攻方向“揭榜挂帅”项目（2022SDZG02）；广东省现代农业产业技术体系创新团队项目（2023KJ137） |
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| 中文摘要: |
| 【目的】坦布苏病毒（Tembusu virus，TMUV）病是重要的水禽传染病，研究发现 TMUV 感染鸭早期，
2 群 TMUV 在肝、肾、脑等组织中的病毒拷贝数显著高于 3 群 TMUV。研究 2 群 TMUV 非结构蛋白（Non-structural
protein，NS protein）和 3 群 TMUV NS 蛋白对鸭天然免疫反应是否存在差异。【方法】以 2 群 TMUV-JM 株和 3 群
TMUV-GX 株为研究对象，构建两种毒株 NS 蛋白真核表达质粒，通过双荧光素酶报告系统研究 NS 蛋白对视黄酸
诱导基因蛋白 I（Retinoic acid-inducible gene protein I，RIG-I）诱导的 β 干扰素（β interferon，IFN-β，为 I 型）启
动子活性的影响。构建重组嵌合 NS1 蛋白真核表达质粒，通过激光共聚焦、免疫共沉淀、Western Blotting 技术研
究 NS1 与 RIG -I 信号通路中关键分子的互作区域。利用反向遗传操作系统构建 NS1 重组嵌合病毒，研究 NS1 在
TMUV 感染 DEF 细胞后对 IFN-β 产生的抑制作用。【结果】TMUV-JM 株 NS1 能抑制 RIG-I 诱导的 IFN-β 启动子活
性，而 TMUV-GX 株 NS1 对其无抑制作用。进一步研究发现，TANK 结合激酶 1（TANK-binding kinase 1，TBK1）
为 TMUV-JM NS1 蛋白抑制 RIG -I 介导的 I 型 IFN 表达的作用节点分子，且 NS1 蛋白 255~352 aa 为发挥抑制作用的
功能区域。TMUV-JM NS1 与 TBK1 不存在直接相互作用，是间接降低 TBK1 磷酸化水平从而降低 I 型 IFN 的表达量。
【结论】2 群 TMUV NS1 具有抑制 RIG -I 信号通路的活性，并鉴定出其抑制功能的关键活性区域及作用的通路节点
分子，明确 2 群 TMUV NS1 通过间接抑制 TBK1 磷酸化而影响鸭 I 型 IFN 产生。 |
| 英文摘要: |
| 【Objective】Tembusu virus (TMUV) disease is an important infectious disease in waterfowl. In previous
studies, we found that in the early stages of TMUV infection in ducks, the viral copy number of group 2 TMUV in organs such as the liver, kidney, and brain were significantly higher than those of group 3 TMUV. The study aimed to explore whether group
2 TMUV NS proteins had different effects on the innate immune response of ducks compared with group 3 TMUV.【Method】
Taking the group 2 TMUV-JM strain and the group 3 TMUV-GX strain as research subjects, we constructed the eukaryotic
expression plasmids of NS proteins of the two strains and compared the effects of the NS proteins on the RIG-I-induced
activity of the IFN-β (Type I) promoter by a dual-Luciferase reporter system. With the eukaryotic expression plasmids of the
constructed recombinant chimeric NS1 proteins, we investigated the interaction region between NS1 and the key molecules
of RIG-I signaling pathway by confocal laser scanning microscopy, co-IP and Western Blotting. By using the reverse genetic
system, we constructed NS1 recombinant chimeric TMUV to clarify the inhibitory effect of NS1 on the IFN-β in DEF cells
with TMUV infection.【Result】The study results showed that TMUV-JM NS1 could inhibit RIG-I-induced activation of the
IFN-β promoter, while TMUV-GX NS1 did not exhibit the inhibitory activity. Further studies revealed that the TMUV-JM NS1
inhibited the expression of type I IFN via targeting TBK1, and the NS1 255-352 aa was the functional region of the inhibitory
effect. It was found that TMUV-JM NS1 did not interact with TBK1 directly, but reduced the phosphorylation level of TBK1
indirectly, thereby suppressed the expression of type I IFN.【Conclusion】Based on the study results, we found that the group
2 TMUV NS1 has activity in inhibiting the RIG-I signaling pathway, identified the key activity region and targeted molecule of
its inhibitory pathway, and clarified that group 2 TMUV NS1 affected duck type I IFN production by indirectly inhibiting the
phosphorylation of TBK1. |
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