| 胡亚平，郭雁君，吉前华，蒋 惠，郭丽英，张小凤.油菜FAD2 基因的克隆与功能分析[J].广东农业科学,2016,43(1):15-23 |
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油菜FAD2 基因的克隆与功能分析 |
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| 中文关键词: 油酸去饱和酶 油菜 基因克隆；转基因，功能分析 |
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| 中文摘要: |
| 油酸去饱和酶FAD2 基因催化C18∶1 脂肪酸脱氢生成C18∶2 脂肪酸，直接决定了油料作物的油脂品质，同时对植物的抗冻能力至关重要。通过RT-PCR 从甘蓝型油菜品种“中双9 号”中克隆了BnFAD2基因的全长cDNA 序列，该基因编码一个长384aa 的脂肪酸去饱和酶蛋白，分子量44.2 ku，等电点pI 值为8.54，对应的基因组序列无内含子。使用荧光定量RT-PCR 发现它在种子发育到25 d 时转录水平最高；使用生物信息学手段发现该蛋白具有6 个跨膜区，定位在内质网膜上，不含信号肽。将该基因克隆到植物转基因载体pBILP2PTNap 中，通过农杆菌LBA4404 介导转化了拟南芥fad2 基因突变体，使其在种子中超量表达，共获得20 株转基因阳性植株。使用气相色谱法比较野生型植株、突变体植株、转基因阳性植株种子中脂肪酸的组成成分，结果发现转基因前后，种子中油酸（C18∶1）的含量从53.8% 降低到12.4%～34.1%，亚油酸（C18∶2）含量从2.9% 提高到11.5%～62.7%，说明这些转入的BnFAD2 基因在不同植株中均能不同程度地互补fad2 突变体的表型，证明克隆得到的油菜BnFAD2 基因具有完整的催化功能。 |
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