| 鲁中爽 1，许会会 2，蔡维北 1，武 悦 1，杨莲花 1，王泽宇 1，王 楠 3，徐一鸣 4.非洲猪瘟病毒 CP204L 基因的生物信息学分析、载体构建及蛋白表达[J].广东农业科学,2020,47(7):128-136 |
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非洲猪瘟病毒 CP204L 基因的生物信息学分析、载体构建及蛋白表达 |
| Bioinformatics Analysis, Vector Construction and Protein Expression of African Swine Fever Virus CP204L Gene |
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| DOI：10.16768/j.issn.1004-874X.2020.07.016 |
| 中文关键词: 非洲猪瘟病毒（ASFV） 生物信息学 表达载体 诱导表达 |
| 英文关键词: African swine fever virus（ASFV） bioinformatics expression vector inducible expression |
| 基金项目:吉林省新型动物疫苗研发项目长春新区医药健康重大科技研发平台项目（KCW-201802） |
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| 中文摘要: |
| 【 目 的】 非 洲 猪 瘟 病（African swine fever，ASF） 是 一 种 由 非 洲 猪 瘟 病 毒（African swine fever virus，ASFV）导致的，能引起猪高度致死的急性传染病。采用生物学手段制备检测试剂能更快、更有效地监测疫情，对 ASF 疫情的防控尤为重要。【方法】根据 ASFV 的 CP204L 基因 CDS 区序列设计特异性引物并进行PCR 扩增，将目的基因片段与 p EASY-T5 连接构建克隆载体，利用生物信息学软件对蛋白进行生物信息学分析，用 T4 连接酶构建重组载体 pET-32a（+）-CP204L，将成功构建的重组表达载体质粒转入感受态 Rosetta（DE3）中，用 1 mmol/L IPTG、37 ℃诱导表达 8 h 后进行 SDS-PAGE 电泳鉴定蛋白表达。【结果】生物信息学分析结果表明，P30 蛋白是一种主要由无规卷曲 α 螺旋和 β 折叠组成的亲水和稳定蛋白，PCR 扩增及测序比对结果证明成功构建了重组表达载体，SDS-PAGE 电泳验证了在 24.3 ku 处有潜在的 P30 蛋白表达。【结论】通过生物信息学软件在分子层面分析了 P30 蛋白的理化性质及蛋白结构，P30 蛋白的表达为制备 ASFV 血清学诊断试剂及诊断技术奠定了基础。 |
| 英文摘要: |
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