【研究意义】BALB/c小鼠和C57BL/6小鼠是实验动物中常见的近交系小鼠，在经过至少20代以上近交后，基因的纯合性（遗传位点纯合度大于98.6%）、表型的一致性、遗传的稳定性、背景资料的完整性与分布的广泛性［1］已众所周知。血液生理生化指标不仅反映动物的生理状态和健康状态，还可以评价其生长性能和生产性能，对评价动物的代谢状况、生理状态和饲养管理具有重要意义。同时，血液生理生化指标是实验动物标准化的重要内容，也是肿瘤学、毒理学、病理学、生理学、药学、营养学等领域常用的指标［2-8］，具有重大的临床诊断意义。小鼠是常用且应用最广的实验动物之一，是实验动物中培育品种品系最多的动物，小鼠正常血液生理生化指标的测定与比较对医学等研究具有重要意义。【前人研究进展】迄今已有对15～20 g（3～4周龄）小鼠［9-10］、4～6月龄转基因小鼠［11］等小鼠的血液生理生化指标变化进行比较分析，均表明不同品系小鼠在离乳或相关表达性状开始出现等状态下部分血液生理生化指标存在一定差异。【本研究切入点】小鼠成熟早，繁殖力强［12］，6周龄、9周龄时分别处于性成熟、体成熟阶段［13］。但对与小鼠繁殖性能相关的生理阶段所处年龄和性别的血液生理生化研究分析较少。【拟解决的关键问题】本研究通过对6周龄和9周龄SPF级BALB/c小鼠、C57BL/6小鼠进行血常规、血生化参数进行测定及比较，进一步了解常用近交系小鼠不同性别及所处不同生理阶段与繁殖性能相关的血常规与血生化参数的差异性，为科研工作者及实验动物使用者对近交系小鼠的应用与研究提供一定的基础数据和参考。
1 材料与方法
1.1 试验材料
供试SPF级BALB/c小鼠和C57BL/6小鼠各120只，其中6周龄、9周龄各60只，雌雄各半，均由广东省医学实验动物中心提供，生产许可证号为SCXK粤2018-0002。饲料为实验动物中心提供的无菌繁殖鼠料，合格证号为粤饲证（2019）05073。
主要试剂：DS稀释液、M-52DIFF溶血剂、M-52LH溶血剂，购自深圳迈瑞生物医疗电子股份有限公司；ALT、AST、ALP、CK、TP、ALB、GLOB、GLU、BUN、CREA、TC、TG，购自上海科华生物工程股份有限公司。
主要仪器：全自动血液细胞分析仪（Mindray BC-5000，中国）、低速离心机（TDL-5-A，中国）、全自动生化分析仪（HITACHI 7020，日本）。
1.2 试验方法
1.2.1 饲养方法 BALB/c小鼠和C57BL/6小鼠均饲养在广东省医学实验动物中心SPF级屏障设施中，温度控制在20～26℃，相对湿度约60%。光照周期为10 h明/14 h暗，换气次数大于20次/h。饮用水均经过高温灭菌，紫外照射消毒。自由采食、饮水。笼具与饲料按2次/周进行更换，均经过严格的高温蒸汽灭菌消毒，进出屏障设施均严格遵守相关标准操作规程。
1.2.2 血液标本的采集 2018年12月至2019年1月，随机抽取6周龄和9周龄SPF级BALB/c小鼠、C57BL/6小鼠各60只，雌雄各半，禁食12 h过夜。每只小鼠经1%戊巴比妥钠麻醉，于眼眶静脉丛分别采取0.5 mL全血于EDTA K2抗凝管、1.5 mL离心管中，离心管在3 000 r/min转速下离心10 min。
1.2.3 血常规指标检测 利用全自动血液细胞分析仪检测小鼠全血血常规指标，包括白细胞（WBC）、中性粒细胞（NE）、淋巴细胞（LY）、单核细胞（MO）、嗜酸性粒细胞（EO）、嗜碱性粒细胞（BA）、中性粒细胞比率（NE%）、淋巴细胞比率（LY%）、单核细胞比率（MO%）、嗜酸性粒细胞比率（EO%）、嗜碱性粒细胞比率（BA%）、红细胞（RBC）、血红蛋白（HGB）、红细胞压积（HCT）、红细胞平均体积（MCV）、平均血红蛋白量（MCH）、平均血红蛋白浓度（MCHC）、红细胞分布宽度（RDW）、血小板（PLT）、血小板压积（PCT）、平均血小板压积（MPV）、血小板平均分布宽度（MDW）。
1.2.4 血生化指标检测 利用全自动生化分析仪检测小鼠血清血生化指标，包括丙氨酸氨基转移酶（ALT）、天门冬氨酸氨基转移酶（AST）、碱性磷酸酶（ALP）、肌酸激酶（CK）、总蛋白（TP）、白蛋白（ALB）、血清球蛋白（GLOB）、白蛋白/球蛋白（A/G）、葡萄糖（GLU）、尿素氮（BUN）、肌酐（CREA）、总胆固醇（TC）、甘油三酯（TG）。
1.3 数据统计分析
利用SPSS 21.0软件进行数据处理及差异性分析，组间差异分析用t检验法。
2 结果与分析
2.1 B ALB/c小鼠和C57BL/6小鼠的血常规检测结果
2.1.1 BALB/c小鼠血常规检测结果 从BALB/c小鼠血常规检测结果（表1）可知，6周龄雌、雄性小鼠的MO、NE%、LY%、MO%及PLT差异极显著，NE及MPV差异显著；6周龄与9周龄雌性小鼠的NE%、LY、HGB、HCT、MCV、RDW、PCT及MPV差异极显著，NE及MO%差异显著；9周龄雌、雄性小鼠的WBC、LY%、NE%、MCV、MCH及RBC差异极显著，LY、HGB、HCT差异显著；6周龄与9周龄雄性小鼠的 WBC、LY、EO、NE%、MO%、EO%、RBC、HGB、HCT、RDW、PCT、MPV、MDW差异极显著，LY%差异显著，其余检测指标差异不显著。
表1 6周龄和9周龄SPF级BALB/c小鼠血常规检测结果
Table 1 Blood routine results of 6 weeks old and 9 weeks old SPF BALB/c mice
注：*、**分别表示与同周龄雌性比较差异显著、极显著；△、△△分别表示与6周龄同性别小鼠比较差异显著、极显著。
Note: * and ** represent significant difference and extremely significant difference compared with female mice at the same week age ; △ and △△ represent significant difference and extremely significant difference compared with 6 weeks old homosexual mice .
9周龄9 weeks old♀（n=30） ♂（n=30） ♀（n=30） ♂（n=30）WBC（109/L） 4.13±0.98 4.61±1.23 4.04±0.69 3.11±0.35**△△NE（109/L） 0.95±0.30 0.61±0.27* 0.60±0.32△ 0.68±0.16 LY（109/L） 3.08±0.66 3.79±1.11 3.36±0.49 2.40±0.32**△△MO（109/L） 0.02±0.04 0.11±0.03** 0.02±0.04 0 EO（109/L） 0.08±0.04 0.10±0.04 0.06±0.05 0.03±0.05△△BA（109/L） 0 0 0 0 NE% 22.40±3.17 13.63±5.69** 14.63±5.69△△ 21.91±5.53**△△LY% 75.00±2.93 82.04±5.89** 83.04±5.89 △△ 75.94±5.74*△MO% 1.02±0.19 2.28±0.26** 0.78±0.26△ 0.86±0.38△△EO% 1.58±0.42 2.05±0.63 1.55±0.63 1.29±0.54△△BA% 0 0 0 0 RBC（1012/L） 9.76±0.62 9.85±0.58 10.22±0.45 11.21±0.60**△△HGB（g/L） 140.60±18.95 148.50±8.42 159.70±5.62△△ 165.90±6.89*△△HCT（%） 38.22±2.14 38.63±0.44 41.56±1.74△△ 43.36±1.81*△△MCV（fL） 39.18±0.48 39.22±0.44 40.73±0.44△△ 38.74±0.58**MCH（pg） 14.43±1.97 15.07±0.49 15.63±0.28 14.82±0.29**MCHC（g/L） 368.50±51.43 384.10±10.46 384.50±7.00 382.70±2.71 RDW（%） 12.72±0.71 13.18±0.47 11.18±0.31△△ 11.29±0.35△△PLT（109/L） 701.30±74.67 730.20±93.73** 743.30±70.10 765.00±85.00 PCT（%） 0.30±0.06 0.30±0.06 0.20±0.03△△ 0.22±0.04△△MPV（fL） 4.20±0.67 3.63±0.40* 2.71±0.36△△ 2.87±0.50△△MDW（%） 16.98±0.80 17.48±0.42 16.60±0.66 16.45±0.49△△指标Index 6周龄6 weeks old
2.1.2 C57BL/6小鼠血常规检测结果 从C57BL/6小鼠血常规检测结果（表2）可知，6周龄雌、雄性小鼠血的MO、HCT、RBC差异极显著，WBC、LY、MCH、MCHC、HGB差异显著；6周龄与9周龄雌性小鼠的WBC、NE、MO、MO%、RDW差异极显著，LY、NE%、LY%、MDW差异显著；9周龄雌、雄性小鼠的RBC、MCH差异 极 显 著，WBC、LY、MO、HCT、MCHC、PLT、MPV差异显著；6周龄与9周龄雄性小鼠的 WBC、NE、MO、MO%、RBC、HGB、HCT、MCV、MCH、MCHC、RDW差异极显著，LY、EO差异显著，其余血常规检测指标差异不显著。
表2 6周龄和9周龄SPF级C57BL/6小鼠血常规检测结果
Table 2 Blood routine results of 6 weeks old and 9 weeks old SPF C57BL/6 mice
注：*、**分别表示与同周龄雌性比较差异显著、极显著；△、△△分别表示与6周龄同性别小鼠比较差异显著、极显著。
Note: * and ** represent significant difference and extremely significant difference compared with female mice at the same week age ; △ and △△ represent significant difference and extremely significant difference compared with 6 weeks old homosexual mice .
9周龄9 weeks old♀（n=30） ♂（n=30） ♀（n=30） ♂（n=30）WBC（109/L） 7.32±2.24 5.42±1.67* 4.92±1.01△△ 3.83±1.01*△△NE（109/L） 1.54±0.63 1.21±0.35 0.79±0.40△△ 0.75±0.27△△LY（109/L） 5.49±1.81 3.97±0.82* 4.00±0.87△ 3.00±0.87*△MO（109/L） 0.18±0.04 0.12±0.04** 0.06±0.05△△ 0.02±0.04*△△EO（109/L） 0.11±0.06 0.12±0.04 0.07±0.05 0.07±0.07△BA（109/L） 0 0 0 0 NE% 21.41±5.69 22.10±3.17 16.21±6.93 △ 20.06±6.45 LY% 74.56±5.79 73.80±2.93 81.16±6.97 △ 77.29±6.38 MO% 2.34±0.39 2.22±0.19 1.11±0.26 △△ 1.09±0.37△△EO% 1.69±0.55 1.88±0.42 1.52±0.54 1.56±0.64 BA% 0 0 0 0 RBC（1012/L） 9.05±0.68 8.33±0.39** 9.467±0.84 10.32±0.56**△△HGB（g/L） 137.50±10.38 129.50±5.23* 143.70±12.48 152.00±7.24**△△HCT（%） 36.55±2.74 33.75±1.37** 37.84±3.46 40.78±2.22*△△MCV（fL） 40.39±0.64 40.55±0.61 39.94±0.57 39.50±0.52△△MCH（pg） 15.19±0.33 15.55±0.36* 15.19±0.23 14.73±0.25**△△MCHC（g/L） 376.40±7.17 383.80±6.11* 379.90±6.66 373.00±6.18*△△RDW（%） 13.11±1.02 13.31±0.93 12.11±0.20△△ 12.11±0.24△△PLT（109/L） 540.20±73.63 639.70±178.63 611.40±92.38 713.00±115.84*PCT（%） 0.11±0.03 0.15±0.06 0.11±0.02 0.11±0.02 MPV（fL） 2.09±0.61 2.28±0.49 1.80±0.37 1.55±0.11*△△MDW（%） 17.11±1.08 16.87±1.59 16.22±0.73△ 15.93±0.59指标Index 6周龄6 weeks old
2.2 B ALB/c小鼠和C57BL/6小鼠的血生化检测结果
2.2.1 BALB/c小鼠血生化检测结果 从BALB/c小鼠血生化检测结果（表3）可知，6周龄雌、雄性小鼠的所有检测指标差异均不显著；6周龄与9周龄雌性小鼠的ALP、GLU、CREA、TC、TG差异极显著，AST、ALB、BUN差异显著；9周龄雌、雄性小鼠的AST、ALP、TP、GLOB、A/G、TC、TG差异极显著，BUN差异显著；6周龄与9周龄雄性小鼠的ALP、TP、GLOB、A/G、BUN、CREA差异极显著，ALT、GLU、TG差异显著，其余检测指标差异不显著。
2.2.2 C57BL/6小鼠血生化检测结果 从C57BL/6小鼠血生化检测结果（表4）可知，6周龄雌、雄性小鼠的AST差异极显著，其余检测指标差异不显著；6周龄与9周龄雌性小鼠的ALP、TG差异极显著，AST、TP、GLOB、A/G差异显著；9周龄雌、雄性小鼠的所有检测指标差异均不显著；6周龄与9周龄雄性小鼠的ALP、TP、GLOB、A/G、TG差异极显著，TC差异显著，其余检测指标差异不显著。
3 讨论
实验动物血液生理生化指标是判断动物健康状况和选择合格动物的标准，是临床医学和生物医学研究的重要数据。动物的血液生理生化指标与年龄、性别相关［14］，并呈现出一定的差异，对动物的繁殖性能有一定影响。BALB/c小鼠和C57BL/6小鼠是实验动物中常用的近交系小鼠，其生理生化指标存在一定的差异性，与相关报道的研究结果［15］一致。小鼠成熟早、繁殖力强，一般雌鼠30～50日龄、雄鼠45～60日龄性成熟［16］，雌鼠 65～75日龄、雄鼠 70～80日龄体成熟［17］，性成熟1个月后基本处于体成熟阶段［18］。性别与性成熟、体成熟两个生理阶段的小鼠生理生化指标的差异性为本研究探讨的主要内容，6周龄、9周龄的雌雄小鼠正好符合这一探讨的条件。
表3 6周龄和9周龄SPF级BALB/c小鼠的血生化结果
Table 3 Blood biochemical results of 6 weeks old and 9 weeks old SPF BALB/c mice
注：*、**分别表示与同周龄雌性比较差异显著、极显著；△、△△分别表示与6周龄同性别小鼠比较差异显著、极显著。
Note: * and ** represent significant difference and extremely significant difference compared with female mice at the same week age ; △ and △△ represent significant difference and extremely significant difference compared with 6 weeks old homosexual mice .
9周龄9 weeks old♀（n=30） ♂（n=30） ♀（n=30） ♂（n=30）ALT（U/L） 47.90±6.19 62.70±22.53 43.40±7.75 42.60±6.33△AST（U/L） 128.50±15.18 144.40±38.54 114.90±13.48△ 131.60±8.42**ALP（U/L） 179.70±19.00 188.40±24.09 127.00±10.86△△ 113.50±9.87**△△CK（U/L） 989.10±391.68 981.00±389.27 827.80±367.62 1057.60±140.08 TP（g/L） 54.53±2.29 55.44±2.23 56.30±2.73 60.37±2.74**△△ALB（g/L） 26.53±1.28 26.91±1.25 27.98±1.41△ 27.12±1.24 GLOB（g/L） 28.00±1.94 28.53±1.96 28.32±1.59 33.25±1.78**△△A/G 0.95±0.08 0.95±0.08 0.99±0.04 0.82±0.04**△△GLU（mmol/L） 3.87±0.31 3.84±0.17 2.66±0.59△△ 3.25±0.85△BUN（mmol/L） 5.07±0.37 5.17±0.36 5.64±0.72△ 6.80±1.18*△△CREA（μmol/L） 11.26±1.07 11.30±0.79 8.65±1.42△△ 8.68±2.68△△TC（mmol/L） 2.89±0.37 2.94±0.38 2.18±0.27△△ 2.96±0.30**TG（mmol/L） 1.90±0.43 1.93±0.45 1.24±0.21△△ 1.56±0.24**△指标Index 6周龄6 weeks old
表4 6周龄和9周龄SPF级C57BL/6小鼠的血生化结果
Table 4 Blood biochemical results of 6 weeks old and 9 weeks old SPF C57BL/6 mice
注：*、**分别表示与同周龄雌性比较差异显著、极显著；△、△△分别表示与6周龄同性别小鼠比较差异显著、极显著。
Note: * and ** represent significant difference and extremely significant difference compared with female mice at the same week age ; △ and △△ represent significant difference and extremely significant difference compared with 6 weeks old homosexual mice .
9周龄9 weeks old♀（n=30） ♂（n=30） ♀（n=30） ♂（n=30）ALT（U/L） 43.60±10.48 40.60±8.90 39.45±4.20 35.64±4.86 AST（U/L） 167.2±32.53 139.40±15.36* 137.09±17.96△ 127.82±16.19 ALP（U/L） 251.20±24.66 253.90±19.46 140.09±21.39△△ 147.55±9.85△△CK（U/L） 1104.20±137.03 1108.60±183.71 1130.64±129.28 1083.64±158.66 TP（g/L） 57.47±3.07 56.93±2.98 60.87±3.71△ 62.20±2.12△△ALB（g/L） 30.47±1.34 30.05±1.20 29.94±2.70 30.66±1.25 GLOB（g/L） 27.00±2.07 26.88±2.13 30.94±3.96△ 31.54±2.34△△A/G 1.13±0.07 1.12±0.07 0.98±0.16△ 0.98±0.10△△GLU（mmol/L） 3.56±0.50 3.67±0.56 3.80±0.49 4.13±0.46 BUN（mmol/L） 10.31±0.99 10.67±1.48 9.53±1.04 9.72±1.09 CREA（μmol/L） 14.04±6.49 12.80±4.68 10.86±1.56 12.03±1.28 TC（mmol/L） 2.55±0.38 2.50±0.51 2.71±0.48 2.91±0.32△TG（mmol/L） 1.46±0.39 1.40±0.51 0.86±0.13△△ 0.91±0.09△△指标Index 6周龄6 weeks old
血液生理生化指标不仅可以反映动物的生理状态和健康状态，还可以评价其生长性能和生产性能，对评价动物的代谢状况、生理状态和饲养管理具有重要意义。本研究在严格的实验试验条件下，采用同一仪器对广东省医学实验动物中心的SPF级BALB/c小鼠和C57BL/6小鼠的各项血液生理生化指标进行检测与分析比较，检测数据具有较好的参考价值。
本研究SPF级BALB/c小鼠和C57BL/6小鼠的血液生理生化指标与王冬平等［4］所测定的结果有一定差异，可能原因是由于所用试剂、检测方法等多种因素不同所致［19-20］，但最主要的原因是由于实验动物微生物级别和饲养环境的不同而造成差异。杨林等［11］对MRL/lpr狼疮小鼠和C57小鼠血常规、主要脏器系数的比较结果反映了不同月龄小鼠的血常规指标存在一定的差异性。本研究通过对相同生理阶段雌雄BALB/c小鼠和C57BL/6小鼠进行生理生化指标检测，结果进一步反映了在相同生理阶段的雌雄小鼠血液生理指标存在一定差异性；不同生理阶段的同性小鼠血液生理指标差异极显著。同时，本研究还发现在相同生理阶段的雌雄小鼠血生化指标差异不显著，不同生理阶段的同性别小鼠血液生化指标差异极显著，这与沙鼠［3］、兔［20］的血生化变化趋势相似。
通过对BALB/c小鼠和C57BL/6小鼠血液生理指标比较可发现，RBC、HGB、HCT、PLT分别随着生理状态的成熟而增加，WBC反而减小。该生理现象出现的原因可能是由于不同的生理阶段，小鼠机体的激素水平、所需能量、耗氧量、免疫系统及功能等方面都有所变化，血常规检验中红细胞、白细胞以及血小板往往表现出不同程度变化［21］；同时，血管内皮细胞分泌多种活性物质维持血管的舒缩状态，调节器官血流的同时对血液凝固、白细胞活性及血小板聚集有重要作用［22］。在同一生理阶段，RBC、HGB、HCT、PLT存在一定差异，可以看出近交系小鼠正常血液生理生化指标在雌雄之间差异显著，故在肿瘤学、药效筛选等实验中注意动物性别的选择。WBC是机体防御的重要组成部分，LY更是在免疫反应中起重要作用，在不同生理阶段的小鼠WBC与LY数量均存在一定差异，说明随着生理阶段的变化，小鼠的免疫机能逐渐增强，故在免疫学、抗体制备等实验中注意动物年龄和生理阶段的选择。
血液生化指标既能反映机体健康状况，又能对疾病进行诊断和监测。ALB反映机体的营养状况，TP由ALB和GLOB组成，能正常维持机体的胶体渗透压，调节体内物质代谢及凝血等功能，本研究血清生化指标中TP、ALB、BUN、TG、GLOB、A/G等指标随生理阶段的变化均表现出差异性。TP［23］、ALB和GLOB水平较高可能与其营养物质代谢改变有关。BUN是由肝脏合成的蛋白质代谢的终产物，是体内的一种代谢废物，摄入的蛋白质过多可导致BUN升高［24-25］，同时日粮中蛋白质的水平也会影响动物母乳中的BUN含量［26-27］和对氮的利用率［28］。本试验中的BUN含量在小鼠正常范围内。CRE是血液中除蛋白质以外的含氮物质，反映肾脏的排氮功能，因此通常用CRE与BUN联合诊断肾功能异常疾病。ALP随生理阶段的变化呈现出显著性差异，性成熟阶段（6周龄）小鼠显著高于体成熟（9周龄）小鼠，这种现象与人体内ALP水平变化趋势相似［29］，这与肝功能的变化有关。GLU是在神经、激素和肝脏等组织器官下调节保持相对恒定［30］，与本研究中同一品系小鼠测定结果相似。
4 结论
本研究比较分析了不同生理阶段和性别BALB/c小鼠、C57BL/6小鼠的血液生理生化参数，发现血液的生理生化值明显受品系、性别和生理阶段等因素的影响，这对进一步研究疾病模型及其他相关研究提供了基础数据，建议科研工作者在使用小鼠进行相关研究时，加强对小鼠品种、品系、性别及生理阶段的选择，同时加强对动物生理与健康状况的监测以及营养水平与生活环境的控制。
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