| 王 燕 1， 2 ， 程 萍 1， 2 ， 喻国辉 1.枯草芽胞杆菌 R31 的原生质体制备方法优化[J].广东农业科学,2015,42(24):107-110 |
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枯草芽胞杆菌 R31 的原生质体制备方法优化 |
| Optimization of preparation method of Bacillussubtilis strain R31 protoplast |
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| DOI： |
| 中文关键词: 枯草芽胞杆菌 原生质体制备 培养时间 溶菌酶 |
| 英文关键词: Bacillus subtilis： protoplast…preparation incubation…time lysozyme |
| 基金项目:广东省科技计划项目（2014A020208015） |
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| 中文摘要: |
| 枯草芽胞杆菌 R31 可用于香蕉枯萎病大田生物防治， 但难以开展遗传操作， 探讨适合 R31 的遗传
转化方法有利于推动 R31 的防病分子机理研究。 根据 R31 在 LB 培养基中的生长曲线和生长状态， 对适合原生
质体制备和再生所需的培养时间和溶菌酶浓度开展优化， 结果显示， R31 在 LB 培养基中培养 3~6…h 时处于对
数生长期， 培养 7…h 后进入稳定期； 显微镜观察显示， 在对数生长前期， R31 菌体以游离方式生长， 培养 5.5…h 左
右菌体开始相互连接， 并逐渐形成网状结构， 培养 8…h 后菌体形成三维网状结构。 游离方式的菌体有利于原生质
体制备和再生， 兼顾原生质体制备所需的菌体浓度， 优化出的最佳培养时间为 4~4.5…h， 此时最佳的溶菌酶浓度
为 3.5…mg/mL， 原生质体的形成率达到 98.45%， 再生率达到 50.18%， 再生细胞占初始细胞的比例达到 49.40%。 |
| 英文摘要: |
| Bacillus subtilis…strain…R31…could…be…used…to…control…banana…Fusarium…Wilt…in…fields， and…could…not…be…
genetic…operated…by…conventional…preparation…of…competent…cells， so…researching…its…genetic…transformation…method…could…
be…benefit…for…the…understanding…of…its…molecular…bio-control…mechanism.…Based…on…the…growth…curve…and…growing…status…of…
strain…R31…in…LB…media， the…culture…time…suit…for…protoplast…preparation…and…regeneration…was…chosen.…The…growth…curve…
study…showed…that…in…LB…media， the…growth…of…R31…was…in…the…logarithmic…phase…from…3…h…to…6…h…after…inoculated， and…it…
was…at…the…end…of…logarithmic…phase…after…4.5…h.…After…7…h， the…growth…of…R31…was…in…the…stationary…phase.…Observations…by…
microscopy…discovered…that…R31…growing…as…free-floating…planktonic…mode…at…the…early…stage…of…the…logarithmic…growth，
but…bacteria…began…to…connect…with…each…other…after…5.5…h…and…gradually…formed…a…net…structure， then…formed…a…three-
dimensional…structure…at…8…h.…Free-floating…planktonic…cells…were…suit…for…the…protoplast…preparation…and…regeneration， but…
gave…consideration…to…the…concentration…of…cells…for…protoplast…preparation， the…optimized…culture…time…was…4-4.5…h， under…
this…condition， and…the…best…lysozyme…concentration…was…3.5…mg/mL. |
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